റീകോമ്പിനന്റ് സ്പൈക്ക് പ്രോട്ടീനിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള പോർസൈൻ അക്യൂട്ട് ഡയേറിയ സിൻഡ്രോം കൊറോണ വൈറസ് IgG ആന്റിബോഡി കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള പരോക്ഷ ELISA രീതിയുടെ വികസനം

പോർസൈൻ അക്യൂട്ട് ഡയേറിയ സിൻഡ്രോം കൊറോണ വൈറസ് (SADS-CoV) എന്നത് പുതുതായി കണ്ടെത്തിയ പോർസൈൻ എന്ററിക് രോഗകാരിയായ കൊറോണ വൈറസാണ്, ഇത് നവജാത പന്നിക്കുട്ടികളിൽ ജലമയമായ വയറിളക്കം ഉണ്ടാക്കുകയും പന്നി വ്യവസായത്തിന് കാര്യമായ സാമ്പത്തിക നഷ്ടം ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യും.നിലവിൽ, SADS-CoV അണുബാധയുടെയും വാക്‌സിന്റെയും ഫലപ്രാപ്തി വിലയിരുത്തുന്നതിന് അനുയോജ്യമായ സീറോളജിക്കൽ രീതികളൊന്നുമില്ല, അതിനാൽ ഈ കുറവ് നികത്താൻ ഫലപ്രദമായ എൻസൈം-ലിങ്ക്ഡ് ഇമ്മ്യൂണോസോർബന്റ് അസ്സേ (ELISA) ഉപയോഗിക്കേണ്ടത് അടിയന്തിരമായി ആവശ്യമാണ്.ഇവിടെ, ഹ്യൂമൻ ഐജിജി എഫ്‌സി ഡൊമെയ്‌നുമായി സംയോജിപ്പിച്ച SADS-CoV സ്പൈക്ക് (S) പ്രോട്ടീൻ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ഒരു റീകോമ്പിനന്റ് പ്ലാസ്മിഡ്, റീകോമ്പിനന്റ് ബാക്കുലോവൈറസ് ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കുന്നതിനായി നിർമ്മിക്കുകയും HEK 293F സെല്ലുകളിൽ പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.എസ്-എഫ്‌സി പ്രോട്ടീൻ പ്രോട്ടീൻ ജി റെസിൻ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും മനുഷ്യവിരുദ്ധ എഫ്‌സി, ആന്റി എസ്എഡിഎസ്-കോവി ആന്റിബോഡികൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പ്രതിപ്രവർത്തനം നിലനിർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.പരോക്ഷമായ ELISA (S-iELISA) വികസിപ്പിക്കുന്നതിനും S-iELISA യുടെ പ്രതികരണ സാഹചര്യങ്ങൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിനും S-Fc പ്രോട്ടീൻ ഉപയോഗിച്ചു.തൽഫലമായി, ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് അസെയും (IFA) വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗും സ്ഥിരീകരിച്ച 40 SADS-CoV നെഗറ്റീവ് സെറയുടെ OD450nm മൂല്യം വിശകലനം ചെയ്തുകൊണ്ട്, കട്ട്-ഓഫ് മൂല്യം 0.3711 ആയി നിർണ്ണയിച്ചു.S-iELISA-യുടെ റണ്ണുകൾക്കിടയിലും അതിനിടയിലും 6 SADS-CoV പോസിറ്റീവ് സെറയുടെ കോഫിഫിഷ്യന്റ് ഓഫ് വേരിയേഷൻ (CV) എല്ലാം 10% ൽ താഴെയാണ്.മറ്റ് പോർസൈൻ വൈറസ് സെറയുമായി S-iELISA യ്ക്ക് ക്രോസ്-റിയാക്‌റ്റിവിറ്റി ഇല്ലെന്ന് ക്രോസ്-റിയാക്‌റ്റിവിറ്റി ടെസ്റ്റ് കാണിച്ചു.കൂടാതെ, 111 ക്ലിനിക്കൽ സെറം സാമ്പിളുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, IFA, S-iELISA എന്നിവയുടെ മൊത്തത്തിലുള്ള യാദൃശ്ചികത 97.3% ആയിരുന്നു.സെറത്തിന്റെ 7 വ്യത്യസ്ത OD450nm മൂല്യങ്ങളുള്ള വൈറസ് ന്യൂട്രലൈസേഷൻ ടെസ്റ്റ്, S-iELISA കണ്ടെത്തിയ OD450nm മൂല്യം വൈറസ് ന്യൂട്രലൈസേഷൻ ടെസ്റ്റുമായി നല്ല ബന്ധമുള്ളതായി കാണിച്ചു.ഒടുവിൽ, 300 പന്നി ഫാം സെറം സാമ്പിളുകളിൽ S-iELISA നടത്തി.മറ്റ് പോർസൈൻ എന്ററോവൈറസുകളുടെ വാണിജ്യ കിറ്റുകൾ കാണിക്കുന്നത് SADS-CoV, TGEV, PDCoV, PEDV എന്നിവയുടെ IgG പോസിറ്റീവ് നിരക്ക് യഥാക്രമം 81.7%, 54%, 65.3% എന്നിങ്ങനെയാണ്., യഥാക്രമം 6%.S-iELISA നിർദ്ദിഷ്‌ടവും സെൻസിറ്റീവും പുനരുൽപ്പാദിപ്പിക്കാവുന്നതുമാണെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ പന്നി വ്യവസായത്തിൽ SADS-CoV അണുബാധ കണ്ടെത്താനും ഇത് ഉപയോഗിക്കാനാകും.ഈ ലേഖനം പകർപ്പവകാശത്താൽ പരിരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു.എല്ലാ അവകാശങ്ങളും നിക്ഷിപ്തം.